JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 3:02 min. • July 8th, 2025
Eseguire sezioni di biopsia di aspirazione rettale umana fissa con antigeni proteici esposti e perossidasi endogene inattivate.
Aggiungere una soluzione bloccante per prevenire il legame di anticorpi non specifici.
Sostituire la soluzione bloccante con anticorpi primari che si legano alla proteina bersaglio delle cellule gliali, S-100, un marcatore della malattia di Hirschsprung.
Rimuovere gli anticorpi non legati e incubare con polimeri di perossidasi per amplificare il segnale.
Lavare per rimuovere il polimero in eccesso. Aggiungere gli anticorpi secondari che si legano ai polimeri enzimatici e agli anticorpi primari.
Rimuovere gli anticorpi non legati e aggiungere un substrato cromogenico.
Le perossidasi reagiscono con il substrato, formando un precipitato colorato.
Risciacquare per rimuovere il precipitato in eccesso.
Aggiungi un colorante per macchiare i nuclei.
Lavare con una soluzione acido-etanola per rimuovere il colorante in eccesso.
Successivamente, disidratare le sezioni utilizzando concentrazioni crescenti di etanolo seguito da xilene.
Infine, montare e osservare al microscopio per visualizzare la colorazione che indica la presenza della proteina bersaglio.
Scartare l'
Visualizza la trascrizione completa e accedi a migliaia di video scientifici