JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 4:35 min. • July 8th, 2025
Prendiamo un ratto anestetizzato con il cranio esposto e una sonda impiantata per misurare la pressione intracranica.
Utilizzando un punto di riferimento sul cranio, segnare il sito di destinazione e praticare un foro.
Rimuovere i frammenti di osso e riempire il foro con cera d'osso.
Praticare un altro foro. Localizzare un vaso sanguigno e fissare una sonda per misurare il flusso sanguigno cerebrale.
Prendi un ago e inseriscilo nel cervello fino a quando il cranio non viene sentito.
Ritrarsi leggermente per garantire il suo posizionamento davanti al chiasma ottico, dove si trovano i principali vasi sanguigni.
Riempi la camera dell'ago con sangue fresco prelevato dalla coda del ratto e collega la siringa contenente il sangue.
Iniettare il sangue nello spazio subaracnoideo pieno di liquido tra le membrane cerebrali esterne e interne, che aumenta la pressione intracranica, causando la costrizione dei vasi sanguigni.
Ciò porta a una diminuzione del flusso sanguigno cerebrale, stabilendo un modello di emorragia subaracnoidea.
Per posizionare la sonda laser Doppler, praticare un'incisione di 15 millimetri caudalmente nella linea mediana, iniziando appena anteriormente agli occhi. Dopo aver rimosso il tessuto connettivo e i muscoli con una pinza, utilizzare l'estremità di un batuffolo di cotone sterile come regime per identificare il bregma e le suture coronali.
Dopo aver posizionato il divaricatore armato, posizionare un ago spinale calibro 25 nel telaio stereotassico esattamente sulla bregma e annotare la posizione. Quindi, rimuovi l'ago dal bregma. Spostare il telaio anteriormente di 6,5 millimetri, quindi sostituire l'ago nella linea mediana per segnare il lato della perforazione.
Forare fino a quando la dura madre non viene identificata sotto l'osso. Usando una pinza dritta, rimuovere delicatamente i frammenti ossei, quindi riempire la cavità con cera ossea. Successivamente, da 3 a 4 millimetri lateralmente a destra della bregma e appena anteriormente alla sutura coronale per il laser Doppler, praticare un altro foro facendo attenzione a non penetrare nella dura madre.
Cerca i vasi in cui il laser Doppler può misurare il flusso sanguigno. Posizionare il laser Doppler e controllare i valori. È richiesto un valore minimo di 100 unità di flusso. Se i valori rimangono accettabili dopo aver rimosso il microscopio, aggiungere 1 goccia di colla per fissare la sonda. Ricontrollare per confermare se il valore è superiore a 80 unità di flusso.
Per indurre l'emorragia subaracnoidea, inserire delicatamente l'ago attraverso il cranio nella linea mediana tra gli emisferi fino a quando non si avverte una resistenza dovuta alla base del cranio. Ritrarre l'ago di 1 millimetro per garantire il corretto posizionamento appena anteriormente al chiasma ottico. Per garantire il risultato più omogeneo durante l'iniezione del sangue, ruotare l'ago in senso orario di 90 gradi in modo che la punta dell'ago sia rivolta a destra. Quindi, rimuovere lo stiletto.
Dopo un equilibrio di 15 minuti, regolare il livello di anestesia per ottenere una pressione arteriosa media nell'intervallo da 80 a 100 millimetri di mercurio. Quindi, eseguire un'analisi dei gas nel sangue per confermare che il pH, la pressione parziale dell'anidride carbonica e la pressione parziale dell'ossigeno rientrino nei parametri fisiologici.
Successivamente, utilizzando una siringa da 1 millilitro con un ago smussato calibro 23, prelevare 500 microlitri di sangue dal catetere di coda. Per evitare l'iniezione di aria, riempire di sangue lo spazio morto della camera dell'ago spinale. Dopo aver regolato il volume del sangue nella siringa a 300 microlitri, collegare la siringa all'ago spinale. Quindi, afferrando saldamente la siringa, iniettare il sangue manualmente per superare la pressione arteriosa media. Osservare un forte aumento della pressione intracerebrale e una concomitante ripida diminuzione del flusso sanguigno cerebrale.