Trattamento delle fette coronali di ratto con un peptide neurotossico

Prendi una sezione di cervello coronale di ratto e tagliala lungo la linea mediana per ottenere emislici, assicurandoti che entrambi provengano dalla stessa regione anatomica per esperimenti di controllo e test.

Trasferire gli emislici in aCSF ossigenato per il recupero.

Successivamente, mettili in fiale con aCSF per il controllo e aCSF con un peptide neurotossico per il test.

Sigillare le fiale con aghi ossigenanti per fornire ossigeno al tessuto e incubare.

Nella fiala di test, il peptide neurotossico si lega al suo recettore neuronale, interrompendo la normale segnalazione neuronale.

Questa segnalazione interrotta porta all'accumulo di proteine neurotossiche e altera le proteine associate ai microtubuli, promuovendo la neurodegenerazione.

Dopo l'incubazione, trasferire gli emislici in provette contenenti tampone di lisi refrigerato.

Omogeneizzano il tessuto per rilasciare il contenuto cellulare, mentre gli inibitori nel tampone impediscono la degradazione delle proteine.

Centrifugare e raccogliere il surnatante contenente proteine solubili e conservarlo per ulteriori analisi.

Dividi accuratamente ogni sezione con piccole forbici lungo la linea mediana per ottenere due emifette s