Studio della trasmigrazione dei linfociti attraverso un monostrato di cellule endoteliali microvascolari

Prelevare una micropiastra con inserti transwell rivestiti con proteine ECM per promuovere l'adesione cellulare.

Aggiungere le cellule endoteliali microvascolari del cervello umano, o HBMEC, negli inserti e un mezzo di crescita nei compartimenti inferiori.

Incubare, permettendo alle cellule di aderire e crescere in un monostrato. Queste cellule esprimono giunzioni strette, imitando l'endotelio della barriera emato-encefalica che limita il passaggio di cellule e molecole.

Rimuovere il mezzo. Aggiungere cellule mononucleate del sangue periferico, o PBMC, agli inserti e un terreno di coltura ai compartimenti inferiori.

Incubare, consentendo ai linfociti PBMC di interagire con le cellule endoteliali e quindi passare tra di loro, un processo chiamato trasmigrazione.

Sciacquare il fondo dell'inserto, raccogliendo le cellule trasmigrate aderenti negli scomparti inferiori.

Introdurre le microsfere fluorescenti come riferimento per la quantificazione cellulare.

Trasferire la sospensione in una provetta, centrifugare, scartare il surnatante e risospendere in un cocktail di anticorpi coniugati con fluorofori per marcare i linfociti.

I linfociti trasmigrati sono pronti per la quantificazione t