Misurazione della zona dell'infarto e dell'edema cerebrale in un cervello di ratto dopo l'occlusione dell'arteria cerebrale media

0 visualizzazioni3:15 min • July 8th, 2025

Prendiamo un ratto sottoposto a occlusione dell'arteria cerebrale media, che limita il flusso sanguigno all'emisfero cerebrale destro.

La riduzione dell'afflusso di sangue priva le cellule cerebrali di ossigeno, interrompe la regolazione dell'acqua, provoca gonfiore o edema cellulare e porta alla rottura della barriera emato-encefalica.

Le cellule danneggiate alla fine muoiono, formando una zona di infarto.

Iniettare un colorante blu nella vena della coda del ratto per rilevare l'interruzione della BBB.

Raccogli il cervello, affettalo con lame di rasoio e incuba le fette in una soluzione di colorante redox.

Nelle cellule viventi, il colorante reagisce con le deidrogenasi mitocondriali e subisce una riduzione, trasformando il tessuto vitale in rosso.

Le aree infartuate, prive di attività deidrogenasi, rimangono bianche.

Scansiona le fette per ottenere immagini ad alta risoluzione.

Utilizzando un software di analisi delle immagini, applicare un filtro blu per eliminare il colore del colorante blu, convertendo le immagini in scala di grigi.

Applicare la soglia per distinguere il tessuto nero sano dal tessuto bianco infartuato.

Calcola la zona dell'infarto e l'edema cerebrale come percentuale dell'emisfero controlaterale non interessato.

Per iniziare, rimuovi il cervello di ratto e taglia sezioni orizzontali spesse 2 millimetri con una lama di rasoio a filo singolo non rivestita in acciaio inossidabile da 0,009 pollici. Posizionare le sezioni in 0,005% TTC e incubarle per 30 minuti a 37 gradi Celsius. Quindi, posizionare il tessuto cerebrale sui vetrini del microscopio ed eseguire la scansione ottica delle sei fette di cervello con una risoluzione di 1.600 x 1.600 DPI. Usa un editor di foto per aggiungere un filtro blu alle immagini.

Dopo aver aperto il software, vai su Immagine, Regolazioni e Mixer canali. Selezionare Blu come canale di uscita e selezionare Monocromatico. Quindi fare clic su OK. Salvare l'immagine nel formato di file JPEG. Utilizzare lo strumento di selezione poligono in ImageJ versione 1.37 per selezionare ogni emisfero di ciascuna delle sei sezioni del cervello e salvarlo come file immagine separato.

Per calcolare il volume dell'infarto e l'edema cerebrale, utilizzare una macro per convertire i pixel nell'immagine in bianco o nero in base a una soglia. Quindi, chiudi tutti i file e usa una seconda macro per confrontare il numero di pixel bianchi e neri per determinare il volume dell'infarto e l'edema cerebrale. Copia i dati grezzi in un foglio di calcolo. Quando si calcola il volume dell'infarto, correggere il gonfiore dei tessuti utilizzando i rapporti degli emisferi cerebrali omolaterali e controlaterali. Esprimere le aree di edema cerebrale come percentuale delle aree standard dell'emisfero controlaterale non interessato.

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Ultimo aggiornamento: 29 agosto 2026