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Neuroscienze
0 visualizzazioni • 2:58 min. • July 8th, 2025
Prendete una sezione fissa del cervello di topo contenente il nucleo basale di Meynert, ricco di fibre nervose che esprimono l'enzima colina acetiltransferasi.
La sezione viene pretrattata per disattivare la perossidasi endogena.
Aggiungere un detergente per permeabilizzare le membrane cellulari, seguito da una soluzione bloccante per prevenire il legame di anticorpi non specifici.
Sostituire la soluzione con anticorpi primari che si legano alla colina acetiltransferasi.
Lavare con tampone per rimuovere gli anticorpi non legati. Incubare con anticorpi secondari marcati con biotina, che si legano agli anticorpi primari.
Rimuovere gli anticorpi non legati e aggiungere i complessi avidina-biotina-perossidasi, che si legano agli anticorpi secondari.
Lavare per rimuovere i complessi in eccesso.
Aggiungere un substrato cromogenico che reagisce con la perossidasi, formando un precipitato colorato.
Sciacquare con acqua distillata per rimuovere il precipitato in eccesso.
Trasferire la sezione su un vetrino gelatinizzato.
Successivamente, disidratare la sezione utilizzando concentrazioni crescenti di etanolo, seguite da xilene.
Montare la sezione e osservare al microscopio per visualizzare l
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