Misurazione dell'assorbimento della dopamina nei sinaptosomi cerebrali di topo utilizzando la dopamina radiomarcata

Raccogliere sinaptosomi, strutture legate alla membrana derivate dai terminali presinaptici intatti delle sinapsi neuronali che contengono trasportatori della dopamina (DAT), da un cervello di topo.

Riempire le provette con tampone contenente ligandi e le provette di riferimento con tampone contenente ligandi e un inibitore DAT.

Aggiungi i sinaptosomi.

I ligandi inibiscono gli enzimi che degradano la dopamina e altri trasportatori, impedendo la degradazione della dopamina e l'assorbimento aspecifico.

Introdurre dopamina non marcata e radiomarcata.

Nella condizione di test, il DAT sinaptosomiale assorbe la dopamina.

Nella condizione di riferimento, l'inibitore impedisce l'assorbimento della dopamina mediato da DAT, consentendo solo l'assorbimento di fondo.

Aggiungere i campioni a filtri in microfibra che trattengono i sinaptosomi.

Lavare per rimuovere la dopamina non legata.

Trasferire i filtri in tubi a scintillazione.

Aggiungere liquido di scintillazione contenente un composto radiosensibile.

Posizionare i tubi in un contatore di scintillazione.

Le emissioni radioattive della dopamina eccitano il composto a emettere luce, che viene misurata dal contatore.

Sottrarre il riferimento