Marcatura di interneuroni riempiti di biocitina in fette di ippocampo di ratto per la visualizzazione

Prendi fette di ippocampo di ratto fisse e permeabilizzate contenenti interneuroni pieni di biocitina con perossidasi endogene inattivate.

Aggiungere complessi avidina-biotina (ABC) contenenti perossidasi di rafano (HRP) e incubare, consentendo all'avidina di legarsi alla biocitina.

Lavare via l'ABC non legato.

Aggiungere una miscela di substrato cromogenico e potenziatore di metalli, quindi incubare.

Introdurre il perossido di idrogeno per attivare l'HRP, che ossida il substrato per formare un precipitato scuro, mentre l'enhancer migliora il contrasto.

Trasferire le fette su carta da filtro e rimuovere il tampone in eccesso. Trattare con tetrossido di osmio per migliorare il contrasto.

Posizionare le fette su un vetrino e montarle. Disidratarli aumentando le concentrazioni di etanolo.

Lavate le fette in etanolo assoluto e ossido di propilene.

Aggiungere la resina per infiltrare i tessuti.

Metti le fette in una planchette e scalda per polimerizzare la resina. Trasferire le fette su un vetrino, posizionare un vetrino coprioggetti e solidificare la resina.

Utilizzando la microscopia ottica, visualizza gli interneuroni pieni di biocitina colorati in modo scuro.

Mettere le sezioni in u