JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 2:08 min. • July 8th, 2025
Inizia con una piastra contenente motoneuroni mielinizzati in coltura, cellule nervose che controllano i muscoli e miotubi, cellule muscolari multinucleate.
Il motoneurone è collegato al miotubo attraverso una giunzione neuromuscolare o NMJ, un sito per la trasmissione del segnale.
Aggiungi il cloruro di calcio al pozzo.
Osserva al microscopio invertito per l'imaging dal vivo e registra un filmato.
Gli ioni calcio entrano nel motoneurone e innescano il rilascio di acetilcolina, o ACh, un neurotrasmettitore eccitatorio.
Questi neurotrasmettitori si legano ai recettori ACh sui miotubi, consentendo agli ioni sodio di entrare e innescando la contrazione dei miotubi.
Registra il filmato. Il software genera quindi un grafico time-motion codificato a colori per le contrazioni del miotubo, dove il colore rosso indica la velocità più alta e il blu rappresenta la velocità più lenta.
Successivamente, introduci un bloccante neuromuscolare che si lega ai recettori ACh. Questo previene l'afflusso di sodio e limita le contrazioni del miotubo.
Registrare nuovamente il filmato. Una diminuzione del colore rosso indica una riduzione delle contrazioni del miotubo.
Per innescare le contrazioni del miotubo, aggiungere 25 millimolari di cloruro di calcio a ciascun pozzetto di cellule della giunzione neuromuscolare differenziata. Ed entro uno o due minuti dal trattamento, posizionare la piastra sul tavolino di un microscopio invertito. Utilizzando la microscopia su cellule vive, registrare un filmato della contrazione del miotubo per 20 secondi. Al termine della registrazione, aggiungere 300 nanogrammi per millilitro di curaro al terreno di coltura e registrare il filmato per altri 20 secondi, prima di aprire il file del filmato in un programma software di analisi dei vettori di movimento appropriato per l'analisi.