Colorazione a fluorescenza di cellule di cresta neurale coltivate su idrogel di rigidità variabile

Prendi colture cellulari aderenti della cresta neurale cresciute su vetrini coprioggetti rivestiti con idrogel di varia rigidità. Lavare le celle con tampone.

Aggiungere paraformaldeide per fissare le cellule e preservare la morfologia cellulare.

Lavare le celle con tampone per rimuovere l'eccesso di paraformaldeide.

Successivamente, aggiungi un detergente non ionico per permeabilizzare le membrane cellulari.

Lavare le celle con un tampone per rimuovere il detersivo in eccesso.

Quindi, introdurre una soluzione di blocco per impedire l'associazione non specifica.

Incubare le cellule con una sonda di actina filamentosa ad alta affinità che si lega ai filamenti di actina.

Lavare le celle con tampone per rimuovere eventuali sonde non legate.

Aggiungere un colorante nucleare fluorescente per colorare i nuclei, quindi lavare con tampone per rimuovere il colorante in eccesso.

Applicare il terreno di montaggio sui vetrini coprioggetti ed esaminare le cellule colorate al microscopio a fluorescenza.

Le cellule coltivate su idrogel più rigidi mostrano una maggiore formazione di filamenti di actina e una morfologia più diffusa rispetto a quelle coltivate su idrogel più morbidi.

Usa le pinzette