JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 4:11 min. • July 8th, 2025
Mettere le larve di Drosophila di controllo e mutanti in piatti separati contenenti un tampone privo di glucosio.
Sezionare le larve per rimuovere gli organi interni, esponendo il sistema nervoso centrale o il SNC.
Il SNC include un cordone nervoso ventrale che ospita i motoneuroni. Nelle larve mutanti, questi neuroni mostrano un metabolismo del glucosio sovraregolato.
I motoneuroni di entrambi i gruppi esprimono sensori di glucosio intracellulari contenenti fluorofori donatori e accettori.
Posizionare le larve sotto un microscopio confocale. Dopo l'eccitazione, il fluoroforo donatore emette fluorescenza.
Localizza i motoneuroni usando questa fluorescenza.
Sostituire il tampone con una soluzione integrata con glucosio.
Il glucosio entra nei neuroni, legandosi ai sensori e innescando un cambiamento conformazionale che avvicina i due fluorofori.
Dopo l'eccitazione, l'accettore assorbe l'energia emessa dal donatore, chiamata trasferimento di energia di risonanza di fluorescenza o FRET, ed emette fluorescenza.
Il segnale FRET è correlato all'assorbimento del glucosio. Una maggiore intensità del segnale accettore nelle larve mutanti rispetto al controllo indica un metabolismo del glucos
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