JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 4:46 min. • July 8th, 2025
Prendiamo una sezione fissa di tessuto cerebrale di topo contenente una popolazione sparsa di astrociti che esprimono una proteina fluorescente.
Trattare la sezione flottante con un tampone contenente detergente per permeabilizzare le cellule.
Incubare la sezione in un tampone bloccante per prevenire il legame di anticorpi non specifici.
Trattare la sezione con anticorpi primari e incubare per consentire agli anticorpi di legarsi alle proteine fluorescenti negli astrociti.
Lavare via gli anticorpi primari in eccesso utilizzando un tampone.
Successivamente, incubare la sezione con anticorpi secondari marcati con fluoroforo che si legano agli anticorpi primari.
Lavare via gli anticorpi secondari non legati con un tampone.
Trasferire la sezione in una miscela di acqua deionizzata tampone per rimuovere i residui di detersivo.
Posizionare la sezione su un vetrino contenente acqua deionizzata tampone. Rimuovere il liquido in eccesso e aggiungere il supporto di montaggio. Quindi, posizionare un vetrino coprioggetti e fissarlo.
Infine, utilizzare la microscopia confocale per visualizzare gli astrociti fluorescenti marcati che esprimono proteine all'interno della sezione.
Per iniziare, prep
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