Microdissezione a cattura laser per isolare le cellule di Purkinje da un tessuto del cervelletto umano post-mortem

Prendi un tessuto cerebellare umano post-mortem contenente la cellula di Purkinje, il granulo e gli strati cellulari molecolari.

Posizionarlo su un portacampioni del criostato contenente terreni di inclusione parzialmente congelati.

Lasciare che il terreno si congeli completamente, fissando il tessuto.

Trasferire questo gruppo nel braccio di taglio del criostato e lasciare che il tessuto si acclimati alla temperatura del criostato.

Avvicina il tessuto alla lama e taglialo per esporre gli strati della corteccia.

Posizionare una piastra antirollio sopra la lama e ottenere sezioni cerebellari.

Trasferire queste sezioni su un vetrino a membrana.

Incubare in concentrazioni crescenti di etanolo per la fissazione e la disidratazione dei tessuti.

Quindi, incubare in xilene.

Asciugare il vetrino e posizionarlo su un tavolino per microscopio a cattura laser UV.

Posizionare il tappo di raccolta sul tessuto cerebellare.

Microscopicamente, concentrati sulle cellule di Purkinje.

Utilizzando il laser, catturare e raccogliere le cellule di Purkinje per ulteriori analisi.

Per prima cosa, taglia un piccolo pezzo di tessuto per il sezionamento, assicurandoti che la sezione sia composta per circa il 9