JoVE Encyclopedia of Experiments
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 2:10 min • July 8th, 2025
Prendi un disco intervertebrale (IVD), una struttura simile a un cuscino situata tra le vertebre, da una coda bovina.
Posizionalo verticalmente e inietta il TNF-α ricombinante, una citochina pro-infiammatoria, nel nucleo polposo (NP), il nucleo gelatinoso.
Estrarre la siringa a metà e tirare lo stantuffo per creare il vuoto, impedendo il riflusso α TNF-. Quindi, rimuovere la siringa.
Posizionare l'IVD in una camera del bioreattore contenente terreno e applicare quotidianamente un carico di pressione intenso.
Il TNF-α si lega ai suoi recettori sulle cellule NP, innescando una cascata di segnalazione.
Questo attiva le caspasi iniziatrici ed esecutrici, che degradano le proteine cellulari e inducono l'apoptosi.
IlTNF-α attiva anche il fattore di trascrizione NF-κB, che induce l'espressione genica infiammatoria, portando al rilascio di enzimi che degradano la matrice extracellulare dell'IVD.
Inoltre, l'intenso carico di pressione induce stress meccanico, degradando ulteriormente l'IVD.
Ciò riduce l'altezza dell'IVD rispetto ai controlli non trattati, stabilendo un modello degenerativo e proinfiammatorio della malattia IVD in stadio iniziale.
Dopo il primo ciclo di carico dinamico del primo giorno, posizionare direttamente gli IVD in una piastra di Petri in posizione verticale e stabilizzarli con una pinzetta. Iniettare il TNF alfa ricombinante con un ago da insulina calibro 30, lentamente a una velocità di circa 70 microlitri al minuto negli IVD del gruppo patologico. Dopo l'iniezione, tirare indietro la siringa a metà e tirare lo stantuffo per creare un vuoto che impedisca la fuoriuscita della soluzione iniettata. Quindi, rimuovere completamente la siringa dall'IVD.