Ottenere una sospensione unicellulare dal tessuto cerebrale di ratto congelato

Scongelare una sezione di tessuto cerebrale di ratto congelato.

Aggiungere il tampone e tritare il tessuto. Quindi, trasferirlo in una provetta contenente tampone e mescolare.

Centrifugare la miscela ed eliminare il surnatante.

Aggiungere una soluzione di enzima proteolitico al tessuto e risospenderla utilizzando una pipetta di grande diametro.

Incubare la miscela per abbattere la matrice extracellulare, allentando le cellule neurali.

Centrifugare la miscela ed eliminare il surnatante.

Risospendere i frammenti di tessuto in un tampone refrigerato e pipettarli ripetutamente per dissociare le cellule.

Lasciare che i detriti e le cellule non dissociate si depositino, quindi trasferire la sospensione a cellula singola in un nuovo tubo.

Trasferire le celle in etanolo ghiacciato e mescolare. Incubarli per fissare e permeabilizzare le cellule.

Centrifugare la sospensione ed eliminare il surnatante.

Risospendere le cellule neurali in un tampone freddo per ulteriori analisi.

Per tritare il tessuto, lasciare scongelare i campioni su una lastra di vetro fredda per non più di 1 minuto prima di coprire i campioni con una o due gocce di soluzione tampone A. Quindi, tenendo una lama di rasoio com