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Neuroscienze
0 visualizzazioni • 3:08 min. • July 8th, 2025
Prendiamo la parete corporea delle larve di Drosophila, costituita da muscoli innervati dai motoneuroni per formare giunzioni neuromuscolari o NMJ.
La membrana muscolare postsinaptica presso l'NMJ contiene proteine interagenti legate alla membrana, che sono marcate con anticorpi primari.
Aggiungere sonde per il saggio di legatura di prossimità, o PLA, contenenti anticorpi secondari coniugati a oligonucleotidi a filamento singolo. Incubare per far sì che le sonde si leghino agli anticorpi primari.
Lavare via tutte le sonde non legate.
Incubare con tampone di legatura contenente oligonucleotidi connettore ed enzimi ligasi.
La vicinanza delle proteine interagenti facilita il legame del connettore alle sonde. La ligasi quindi sigilla le lacune, creando DNA circolare.
Lavare via tutti i connettori non legati.
Incubare con una soluzione di amplificazione contenente polimerasi, che amplifica il DNA circolare attraverso l'amplificazione a cerchio rotante.
Le sonde del rivelatore marcate con fluoroforo nella soluzione si riuniscono al DNA amplificato e, dopo l'eccitazione, producono un segnale fluorescente.
Montare la parete corporea su un vetrino per visualizzare le interazioni proteina-pr
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