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Neuroscienze
0 visualizzazioni • 2:42 min. • July 8th, 2025
Posizionare i mitocondri isolati dalle cellule di neuroblastoma in un tampone contenente un colorante fluorescente impermeabile alla membrana e legante il calcio.
Incubare per consentire ai mitocondri di stabilizzarsi nel tampone.
Aggiungere un tampone contenente calcio e incubare agitando.
Gli ioni calcio si legano alle molecole del colorante, provocandone la fluorescenza.
Utilizzando uno spettrometro a fluorescenza, monitora la fluorescenza del colorante in tempo reale.
Ora, iniettare il tampone contenente calcio a intervalli regolari.
L'aumento della concentrazione di calcio favorisce l'assorbimento mitocondriale del calcio, riducendo gli ioni di calcio liberi disponibili per legarsi al colorante, con conseguente diminuzione della fluorescenza.
Una volta che i mitocondri raggiungono la loro massima capacità di immagazzinamento del calcio, un'ulteriore aggiunta di calcio innesca l'apertura del poro di transizione della permeabilità mitocondriale (mPTP).
Questa apertura dei pori rilascia il calcio dai mitocondri nel tampone, dove si lega al colorante e provoca un aumento della fluorescenza.
Determinare la quantità totale di calcio necessaria per indurre l'apertura dell'mPTP, che r
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