Immunoistochimica di sezioni di tessuto cerebrale di topo per il targeting dei neuroni della dopamina

Prendi un vetrino rivestito di polimero con sezioni di tessuto cerebrale di topo contenenti neuroni dopaminergici che esprimono tirosina idrossilasi, un enzima chiave per la sintesi della dopamina.
Delinea le sezioni con una penna idrofobica per garantire una colorazione uniforme.
Fissa il tessuto in una soluzione di acetone-metanolo per preservare la morfologia del tessuto.
Risciacqua con un tampone contenente detersivo per permeabilizzare le membrane cellulari.
Incubare con anticorpi primari che hanno come bersaglio la tirosina idrossilasi nei neuroni dopaminergici, quindi lavare per rimuovere gli anticorpi non legati.
Aggiungere anticorpi secondari marcati con colorante fluorescente, colorante nucleare e inibitori della RNasi.
Durante l'incubazione, gli anticorpi secondari si legano agli anticorpi primari, i coloranti nucleari marcano il nucleo e gli inibitori della RNasi inattivano le RNasi.
Risciacquare con tampone. Quindi, disidratare le sezioni di tessuto in concentrazioni crescenti di etanolo.
Incubare in xilene per liberare il tessuto.
Le sezioni di tessuto processate sono ora pronte per la microdissezione a cattura laser, che consente una visualizzazione e una dissezione precise