JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 5:13 min. • April 28th, 2025
Prendi una mosca adattata al buio, anestetizzata, transgenica, con gli occhi bianchi.
La mosca esprime canali ionici TRPL marcati con eGFP nei fotorecettori dell'occhio.
Nell'oscurità, TRPL localizza sulle membrane dei rabdomeri, i microvilli dei fotorecettori.
Usando l'aria compressa, spingi la mosca a testa in giù in un puntale di pipetta.
Taglia la punta e spingi la mosca all'indietro.
Taglialo di nuovo e spingi la mosca in avanti fino a quando sporge solo la sua testa.
Immobilizza la punta nell'argilla da modellare attaccata a un vetrino e posizionala su un tavolino per microscopio a fluorescenza, con l'occhio rivolto radialmente verso l'obiettivo del microscopio.
Aggiungi una goccia d'acqua all'obiettivo, poi abbassalo fino a toccare l'occhio.
Cattura immagini dei fotorecettori.
Misura le intensità di fluorescenza nei rabdomeri, nel corpo cellulare e sullo sfondo.
Illumina la mosca con luce arancione per indurre la traslocazione TRPL nel corpo cellulare.
Ripeti le misurazioni di imaging e fluorescenza.
Confronta le immagini per osservare la ridotta fluorescenza rabdomerale post-illuminazione, indicando la traslocazione TRPL nel corpo cellulare.
Per preparare una mosca in una variante no
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