Generazione di un modello sferoidale tridimensionale dell'invasione delle cellule tumorali

Prendi una coltura di cellule tumorali cerebrali umane.

Trattare con un enzima di dissociazione per interrompere le giunzioni cellulari, separando le cellule aggregate.

Lavare con un tampone per fermare l'attività enzimatica, quindi aggiungere un terreno di coltura per mantenere la vitalità cellulare.

Introduci metilcellulosa, un agente sospensivo.

Trasferisci la sospensione in una micropiastra a fondo tondo e incuba.

La metilcellulosa viscosa mantiene le cellule sospese, favorendo le interazioni cellula-cellula per l'aggregazione in sferoidi.

Mescola gli sferoidi con una matrice di collagene che imita l'ambiente extracellulare fisiologico.

Trasferisci la sospensione in una micropiastra e incuba, permettendo alla matrice di formare un gel che intrappola gli sferoidi.

Aggiungi il terreno di coltura sopra il gel.

Alla periferia dello sferoide, le cellule tumorali perdono l'adesione cellula-cellula e adottano un fenotipo invasivo.

Queste cellule secernono proteasi per degradare la matrice, estendono le sporgenze per ancorarsi e avanzano, invadendo la matrice.

Il modello sferoidale che mostra l'invasione tumorale è pronto per l'analisi.

Per generare sferoidi tumorali di dimensioni uniformi, lavar