JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
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Inizia con un topo anestetizzato con un'arteria carotide comune esposta o CCA.
Il CCA si biforca nell'arteria carotide esterna, o ECA, che fornisce sangue al viso, e nell'arteria carotide interna, o ICA, che fornisce sangue al cervello.
Per prima cosa, posiziona una sutura attorno all'ECA e stringila.
Quindi, aggiungi una sutura stretta sul CCA sotto il sito di iniezione per bloccare il flusso sanguigno.
Inserisci una striscia di carta umida sotto il CCA per supporto.
Posiziona un nodo sciolto sopra il sito di iniezione, quindi inietta le cellule tumorali nel CCA.
A causa dell'ECA suturata, le cellule viaggiano verso l'ICA per raggiungere il cervello.
Dopo l'iniezione, rimuovi l'ago e stringi il nodo distale del CCA per prevenire il riflusso.
Infine, taglia i punti di sutura, rimuovi la striscia, risciacqua con soluzione salina e chiudi la ferita.
Nel corso del tempo, le cellule tumorali migrate si propagano e sviluppano tumori nel cervello.
Posiziona una pinza sottile sotto l'arteria carotide esterna e passa una sutura di seta 5-0 sotto l'arteria. Annodare e stringere la sutura e tagliare la linea in eccesso. Posizionare una pinza sottile sotto l'arteria carotide comune e passare una sutura di seta 5-0 sotto l'arteria.
Fai un nodo e stringi la sutura in una posizione prossimale al sito di iniezione proposto. Tagliare la sutura in eccesso, lasciando circa 10 millimetri di linea. Taglia e inumidisci una striscia di tergicristalli usa e getta a basso contenuto di lanugine di circa 10 per 5 millimetri.
Piega la striscia e posizionala sotto l'arteria carotide nel sito di iniezione proposto. Questo sosterrà il vaso durante l'iniezione. Sul rostrale dell'arteria carotide comune fino al sito di iniezione proposto, posizionare una terza legatura con un nodo allentato. Questo viene serrato solo dopo l'iniezione.
Agita delicatamente la sospensione cellulare e aspira 200 microlitri di sospensione cellulare in una siringa da insulina con un ago calibro 31. Caricare la siringa nel driver della siringa collegato a un pedale di attivazione.
Attacca una cannula sottile con un ago calibro 31 alla siringa e prepara la linea. Controllare se l'arteria carotide è ben posizionata e pressurizzata. Utilizzando due pinze ad angolo sottile, una che si tensiona delicatamente sull'estremità della prima legatura e l'altra che tiene l'ago calibro 31, inserire lentamente l'ago con lo smusso verso l'alto nel lume del vaso sanguigno, facendo attenzione a non perforarlo.
Inietta lentamente 100 microlitri di sospensione cellulare preparata in precedenza nell'arteria carotide comune a 10 microlitri al secondo. Questo consegnerà 2,5 volte 10 alla quinta cellula nel vaso sanguigno. L'iniezione riuscita può essere visualizzata attraverso l'eliminazione del sangue dal vaso sanguigno carotideo.
Solleva e stringi delicatamente la legatura allentata subito dopo aver ritirato l'ago per evitare il riflusso e il sanguinamento. Taglia i punti di sutura in eccesso e rimuovi il pezzo di tergicristalli usa e getta inumiditi e a basso contenuto di lanugine.
Utilizzando una pipetta P200, sciacquare la cavità chirurgica due volte con 150-200 microlitri di acqua sterile o soluzione fisiologica. Dopo aver verificato la presenza di sanguinamenti, riposizionare i tessuti molli, le ghiandole salivari e la pelle sopra l'arteria carotide e la trachea. Chiudere lo strato cutaneo dell'incisione utilizzando un supporto per ago da sutura, una pinza e una sutura monofilamento 6-0 assorbibile o non assorbibile in uno schema continuo.