JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 3:01 min. • April 28th, 2025
Inizia con una piastra multipozzetto a fondo piatto rivestita con una matrice di membrana basale, che contiene polimero extracellulare e proteine di adesione che imitano la matrice del microambiente tumorale.
Introduci un terreno contenente una neurosfera di cellule di glioma derivate da un tumore cerebrale pediatrico, assicurandoti che sia posizionato centralmente nel pozzetto.
La matrice promuove l'attaccamento della neurosfera al pozzo.
Aggiungi un reagente soppressore di sfondo per ridurre al minimo la fluorescenza non specifica.
Successivamente, introduci gli anticorpi anti-CD44 coniugati con fluoroforo verde.
Trasferisci la lastra a un sistema di imaging di cellule vive alloggiato all'interno di un incubatore che mantiene le condizioni fisiologiche della cellula.
Nel corso del tempo, le cellule di glioma esprimono la proteina di adesione cellulare CD44, che interagisce con le proteine di adesione.
Questo attiva la via di segnalazione cellulare e facilita la migrazione cellulare dalla neurosfera.
Gli anticorpi anti-CD44 coniugati con fluoroforo si legano al CD44 espresso sulle cellule di glioma, rendendole fluorescenti.
L'aspetto di cellule fluorescenti verdi che si allontanano dalla n
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