JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
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Prendi una retina fissata chimicamente isolata dall'occhio di un ratto.
L'occhio mostra danni indotti dal calore al plesso vascolare limbare, una rete di vasi sanguigni che circondano la cornea.
Questo danno blocca il drenaggio dei liquidi, aumentando la pressione intraoculare (IOP) e causando la degenerazione delle cellule gangliari retiniche (RGC).
Tratta la retina con una soluzione di permeabilizzazione per permeabilizzare la cellula e le membrane nucleari.
Applica una soluzione bloccante per prevenire il legame di anticorpi non specifici.
Rimuovi la soluzione di blocco.
Introduci anticorpi primari che hanno come bersaglio un fattore di trascrizione prevalentemente espresso nei RGC.
Lava per rimuovere gli anticorpi non legati.
Introduci anticorpi secondari coniugati con fluorofori che si legano agli anticorpi primari.
Lava per rimuovere gli anticorpi non legati.
Controcolora i nuclei con un colorante legante il DNA.
Lava la retina e montala su un vetrino utilizzando un mezzo di montaggio appropriato.
Visualizza la retina sotto un microscopio a epifluorescenza.
Una ridotta densità cellulare nell'occhio danneggiato rispetto al controllo conferma la degenerazione della RGC dovuta all'aumento de
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