Induzione di una lieve lesione cerebrale traumatica in un modello murino

Fissa un topo anestetizzato e preparato in una cornice stereotassica con il cranio esposto.

Identifica i punti di riferimento del cranio. Quindi, posiziona un apparato di supporto per la testa sotto la testa dell'animale e gonfialo per evitare danni all'orecchio.

Allinea un impattatore elettromagnetico a guida stereotassica sopra la testa.

Ripristina le coordinate stereotassiche per allineare con precisione la sonda dell'impattatore sul bersaglio. Collegare un sensore di contatto all'orecchio dell'animale.

Una volta che la sonda tocca il cranio, ritrailo. Imposta la profondità di impatto desiderata e avvia l'impatto con i parametri appropriati.

La sonda eroga una forza controllata al cranio, inducendo l'allungamento assonale e il taglio nei neuroni corticali, che porta a lievi lesioni cerebrali traumatiche.

Misura il tempo di raddrizzamento dell'animale, il tempo impiegato per ritrovare la normale posizione del corpo dopo l'infortunio.

Valuta il mouse per eventuali fratture visibili del cranio.

Quindi, rimuovi il mouse dalla cornice, chiudi l'incisione e applica antibiotici.

Consenti al mouse di recuperare.

Fissa il mouse nella cornice stereotassica utilizzando resina acetalica leggera, barre auricolari a punta affusolata, una barra per morsi e una maschera per anestesia del topo. Quindi, monitorare attentamente la respirazione del topo per garantire la profondità dell'anestesia. Applicare un lubrificante sterile per gli occhi sugli occhi per prevenire l'essiccazione della cornea. Sterilizzare il cuoio capelluto con tamponi di iodio povidone.

Dopo aver accertato la profondità dell'anestesia, fai un'incisione del cuoio capelluto di circa 1 centimetro sulla linea mediana tra gli occhi e il collo usando un bisturi, esponendo il cranio. Lasciare asciugare il cranio per 1 o 2 minuti, quindi identificare il bregma e il lambda. Quindi, posizionare l'apparecchio di supporto per la testa sotto la testa e gonfiare il bulbo con acqua fino a quando non preme contro la parte inferiore della testa del topo ma non solleva la testa dalla barra del morso.

Sposta l'impattatore in posizione sopra la testa del mouse. Estendere l'impattatore posizionando l'interruttore a levetta di estensione-retrazione sull'estensione. Quindi, allineare l'impattatore fino a quando non è centrato sul bregma. Reimpostare le coordinate stereotassiche digitali x e y nel lettore stereotassico su 0. Quindi, allineare la sonda sulla posizione dell'impatto spostando la sonda dal bregma alle coordinate del bersaglio come laterale mediale a 0 millimetri e anteriore posteriore a meno 1,6 millimetri.

Fai clic sul sensore di contatto sull'orecchio del mouse. Abbassare lentamente la punta della sonda con la sonda estesa fino al primo contatto con la superficie. Fermarsi al segnale acustico. Quindi, reimpostare le coordinate z stereotassiche digitali nel lettore stereotassico su 0.

Controlla attentamente se la punta è a filo con il cranio. Quindi, ritrarre l'impattatore posizionando l'interruttore a levetta sulla scatola di controllo in posizione di ritrazione. La punta si ritira e non ha più contatto con la testa fino al momento dell'impatto. Impostare la profondità di impatto regolando la profondità ventrale dorsale a meno 1,2 millimetri. Monitorare attentamente la respirazione del topo per garantire la profondità dell'anestesia e regolare il livello del gas secondo necessità.

Induci l'impatto premendo l'interruttore a levetta destra per l'impatto. La punta della sonda scende alla velocità visualizzata, rimane abbassata per il tempo di permanenza impostato e si ritrae. Avviare il timer immediatamente dopo la lesione alla testa ravvicinata o l'impatto CHI per registrare i tempi di raddrizzamento. Il tempo medio del riflesso raddrizzante è di 5-15 minuti.

Valuta il mouse per fratture visibili del cranio, emorragie e apnea. Rimuovere il mouse dalla cornice stereotassica. Chiudere il cuoio capelluto pinzando insieme la pelle. Quindi applicare un unguento antibiotico triplo con un applicatore sterile con punta di cotone sull'incisione chiusa. Rimetti il mouse in una gabbia di tenuta pulita per il recupero.