Colorazione in immunofluorescenza di tessuto fibrovascolare malato derivato da pazienti con inclusione in gel

Prendi il tessuto fibrovascolare malato rigenerato incorporato in gel di fibrina reidratato, fissato e permeabilizzato derivato dal paziente. Questo tessuto contiene strutture neovascolari irregolari con cellule endoteliali e periciti.

Trattare il tessuto con una soluzione bloccante per prevenire il legame degli anticorpi non specifici.

Incubare con anticorpi primari che hanno come bersaglio le proteine di superficie sulle cellule endoteliali e sui periciti.

Sciacquare con tampone per rimuovere gli anticorpi non legati, quindi incubare nel tampone.

Dopo il lavaggio del tampone, incubare con anticorpi secondari coniugati con colorante fluorescente per legarsi agli anticorpi primari.

Lavare con tampone per rimuovere gli anticorpi in eccesso e incubare in tampone.

Dopo il lavaggio del tampone, aggiungere un colorante nucleare per colorare i nuclei delle cellule. Risciacquare con tampone e acqua deionizzata per rimuovere il colorante non legato.

Trasferire il tessuto su un vetrino da microscopio.

Applicare i supporti di montaggio e sigillare con un vetrino coprioggetti contenente supporti di montaggio a indurimento rapido.

Dopo l'asciugatura all'aria, conservare il vetrino a bassa temperatura.