Immunocolorazione dei neuroni in fette di cervello di topo dopo ibridazione in situ a fluorescenza

Prendi fette di cervello di topo fisse e permeabilizzate contenenti neuroni, inclusi i neuroni colinergici che esprimono colina acetiltransferasi.

Le fette sono sottoposte a ibridazione fluorescente in situ per rilevare mRNA bersaglio localizzati agli assoni colinergici, con conseguente generazione di segnali amplificati utilizzando sonde fluorescenti, che vengono rilevate con la microscopia a fluorescenza.

Aggiungi una soluzione bloccante contenente proteine e un agente estinguente. Le proteine impediscono il legame aspecifico e l'agente estinguente neutralizza i fissativi residui.

Incubare con anticorpi primari che hanno come bersaglio l'acetiltransferasi neuronale della colina.

Lavare con tampone per rimuovere gli anticorpi non legati.

Incubare con anticorpi secondari coniugati con fluorofori che si legano agli anticorpi primari legati alla colina acetiltransferasi.

Lavare con tampone per rimuovere gli anticorpi in eccesso, quindi risciacquare in acqua distillata per rimuovere i residui di tampone.

Monta le fette con un supporto di montaggio contenente una colorazione nucleare per etichettare i nuclei.

Utilizzando la microscopia a fluorescenza, visualizza le fette per visualizzare i seg