Imaging ad alta risoluzione dei recettori dei neurotrasmettitori nelle sinapsi retiniche

Prendi una sezione retinica di topo su una griglia di microscopia elettronica. La sezione contiene cellule gangliari retiniche, o RGC, sinapticamente legate alle cellule bipolari. Le

cellule bipolari presinaptiche contengono vescicole di neurotrasmettitori disposte in una struttura a nastro vicino alla membrana sinaptica.

Le RGC postsinaptiche mostrano recettori di neurotrasmettitori raggruppati sulla loro membrana. Queste cellule sono marcate con la subunità B o CTB della tossina del colera.

Lavare con un tampone per mantenere il pH.

Incubare con un tampone di blocco per mascherare i siti di legame non specifici.

Incubare con anticorpi primari che hanno come bersaglio i recettori dei neurotrasmettitori e CTB.

Lavare con un tampone per rimuovere gli anticorpi non legati e mantenere il pH.

Incubare con anticorpi secondari coniugati a nanoparticelle d'oro di diverse dimensioni, che si legano agli anticorpi primari, marcando le molecole bersaglio.

Rimuovere gli anticorpi non legati, quindi asciugare il campione all'aria.

Applicare metalli pesanti che legano le macromolecole, migliorando il contrasto.

Utilizzando la microscopia elettronica, identificare le RGC utilizzando i CTB marcati e loc