Monitoraggio in tempo reale dell'attivazione del recettore degli odori nelle cellule ricombinanti
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 2:52 min. • April 28th, 2025
Inizia con una piastra multi-pozzetto contenente cellule di mammifero ricombinanti aderenti in una soluzione di stimolazione integrata con luciferina, un substrato luminescente.
Incuba per permettere l'ingresso della luciferina nella cella.
Queste cellule esprimono recettori odorosi legati alla membrana accoppiati con proteine G olfattive e proteine di trasporto dei recettori.
Inoltre, le cellule esprimono proteine citoplasmatiche Glosensor, proteine luminescenti sensibili all'AMP ciclico.
Aggiungere una soluzione odorizzante vaporizzabile nello spazio tra i pozzetti e posizionare la piastra all'interno di uno strumento luminometro pre-bilanciato con lo stesso odorizzante.
Inizia la misurazione della luminescenza.
Le molecole odorose si legano ai recettori odorosi delle cellule, attivando la proteina G accoppiata e dissociando la subunità α della proteina G, o Gα.
La subunità dissociata Gα si lega all'enzima adenilato ciclasi incorporato nella membrana, attivandolo. L'enzima attivato converte gli ATP in AMP ciclici.
Questi AMP ciclici si legano con le proteine glosensore, alterando la loro conformazione e abilitando il legame della luciferina.
Questa interazione produce luminescenza, co
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