Modellazione della rigenerazione sensoriale degli assoni in un ratto utilizzando l'iniezione del ganglio della radice dorsale e la lesione da schiacciamento della radice dorsale

Inizia con un ratto anestetizzato.

Praticare un'incisione cutanea sulla linea mediana tra le vertebre cervicali C2 e T2 toraciche.

Successivamente, incidere lungo la linea mediana del tessuto fibroso bianco e ritrarre il primo strato muscolare.

Sezionare il sottile tessuto membranoso sulla linea mediana del secondo strato muscolare, quindi ritrarre i muscoli longitudinali striati.

Infine, incidere il terzo strato muscolare per esporre la colonna vertebrale.

Rimuovere la lamina e il peduncolo sovrastanti le vertebre sinistre da C4 a T1 per rivelare i gangli della radice dorsale da C5 a C8 o DRG.

Iniettare una sospensione virale adeno-associata ricombinante nei DRG.

Il virus codifica per una proteina che promuove la crescita e che favorisce la rigenerazione assonale.

Usando una pinza, schiacciare le radici dorsali da C5 a C8 per recidere le connessioni assonali dal DRG al midollo spinale, creando una lesione assonale controllata.

Il modello è pronto per studiare la rigenerazione assonale mediata da virus.

Inizia l'intervento chirurgico individuando i processi spinosi C2 e T2 prominenti sulla pelle. Quindi utilizzare un bisturi numero 10, per praticare un'incisione cutanea tra i processi spinosi C2 e T2. Una volta aperta la pelle, una linea mediana di tessuto fibroso bianco dovrebbe essere visibile sul primo strato del muscolo, che ha una consistenza gelatinosa.

Fai un'incisione di dimensioni simili sul primo strato di muscolo lungo la linea mediana bianca. Non andare oltre il prominente processo spinoso T2, poiché c'è un vaso sanguigno principale situato nelle vicinanze. Ritrarre il primo strato di muscolo utilizzando due divaricatori, uno posizionato rostralmente e uno caudalmente.

Il secondo strato di muscolo con un aspetto striato dovrebbe ora essere visibile. Localizzare la linea mediana del secondo strato muscolare, dove si possono osservare due muscoli longitudinali, collegati da un sottile tessuto membranoso. Quindi usa un paio di micro forbici per sezionare il tessuto membranoso e separare i due muscoli longitudinali.

Regola i divaricatori per esporre il terzo strato di muso sottile che copre la colonna vertebrale. I processi spinosi possono essere avvertiti toccando leggermente con un paio di pinze sopra il terzo strato del muscolo. Usa le micro forbici per fare una piccola incisione sul terzo strato di muscolo. E raschiare delicatamente il muscolo dall'osso usando una curette o un bisturi in modo laterale per esporre chiaramente le vertebre.

Per esporre i DRG da C5 a C8 sinistri, utilizzare un paio di rongeur fini per eseguire un'emilaminectomia sinistra sulle vertebre da C4 a T1 rimuovendo con cura parte della lamina e del peduncolo. Una volta che una quantità sufficiente di DRG è stata esposta per l'iniezione, preparare la siringa posizionando la siringa da microlitro riempita di virus dotata di un ago smussato calibro 33 su misura, sul supporto della siringa stereotassica. Successivamente, utilizzare un ago smussato calibro 30 per creare una piccola apertura superficiale su ciascuno dei DRG mirati per facilitare l'inserimento dell'ago per iniezione. Regolare delicatamente le coordinate stereotassiche, per inserire l'ago calibro 33 al centro del DRG.

Idealmente, l'ago dovrebbe essere posizionato al centro del DRG per garantire una diffusione uniforme della soluzione iniettata in tutto il DRG.

Una volta inserito l'ago, utilizzare la pompa a siringa per infusione per iniettare 1 microlitro di virus in ciascun DRG. Durante l'iniezione, il DRG cambierà lentamente colore se la soluzione virale contiene un colorante colorato. Non inserire eccessivamente l'ago, poiché ciò potrebbe causare la fuoriuscita di liquido dal lato ventrale del DRG.

In caso di perdite durante l'iniezione, regolare immediatamente la posizione dell'ago. Tre minuti dopo la fine dell'iniezione, estrarre l'ago per iniezione. Per eseguire una lesione da schiacciamento della radice dorsale da C5 a C8 concomitante, schiacciare ciascuna radice tre volte per 10 secondi utilizzando un paio di pinze a punta fine. Opporsi completamente alle estremità del forcipe. Una linea bianca nel tessuto dovrebbe apparire nel sito di schiacciamento.