Un modello di lesione minima del midollo spinale per studiare l'attivazione e la migrazione delle cellule staminali neurali

Prendi un topo anestetizzato e rasagli la schiena.

Fissalo in un dispositivo stereotassico, con una garza arrotolata posizionata per sostenere la colonna vertebrale toracica.

Disinfetta la pelle, fai un'incisione verticale sulla linea mediana e ritrai la pelle.

Stacca i tendini muscolari dalla colonna vertebrale toracica e ritraili.

Identifica la vertebra bersaglio, poi recidi le articolazioni intervertebrali per rimuoverla.

Esponi il midollo spinale e inserisci un ago piegato su entrambi i lati della linea mediana.

L'inserimento dell'ago crea lesioni superficiali nella sostanza bianca, lo strato esterno del midollo spinale contiene fasci di assoni, lasciando intatto il canale centrale.

Rimuovi l'ago, quindi sutura i muscoli e la pelle.

Le cellule danneggiate rilasciano segnali che attivano le cellule immunitarie residenti nei tessuti, che a loro volta attivano le cellule staminali neurali, o NSC, che circondano il canale centrale.

Le NSC attivate migrano verso il sito della lesione, aiutando la riparazione dei tessuti.

Prima di iniziare la procedura, utilizzare un tagliacapelli per rimuovere il pelo dal dorso di un topo anestetizzato dalla parte centrale della schiena al collo e alle orecchie. Dopo aver fissato il mouse in un dispositivo stereotassico, posiziona quattro o cinque pezzi di garza arrotolata sotto l'addome, tirando leggermente la base della coda per raddrizzare il corpo e la colonna vertebrale.

Spingere il rotolo di garza toracica rostralmente dall'addome del topo verso la parte superiore del torace per sostenere la colonna vertebrale toracica. E usa del nastro da laboratorio per fissare la coda e gli arti in un orientamento simile a una stella. Dopo aver disinfettato la pelle esposta con tamponi sequenziali di etanolo al 70% e iodio povidone, utilizzare una lama di bisturi numero 10 per praticare un'incisione verticale parallela all'asse longitudinale dell'animale, dal punto medio di entrambe le scapole alla curvatura della colonna vertebrale toracica.

Ritrarre la pelle per esporre il tessuto molle e il contorno della colonna vertebrale e identificare il bordo inferiore del cuscinetto adiposo soprascapolare. Quindi, usa il bisturi per tagliare con attenzione, ma con forza, lungo entrambi i lati delle ossa vertebrali da T5 a T8 e 9 per staccare i tendini del muscolo posteriore dalla colonna vertebrale. Riposizionare i divaricatori in modo che i denti dei divaricatori siano inseriti nel sito di incisione su entrambi i lati della colonna vertebrale ed espandere ciascun divaricatore per regolare l'esposizione fino a quando la colonna vertebrale non è sufficientemente sollevata, senza sollecitare troppo gli strati muscolari retratti.

Sotto un microscopio operatorio, pulire accuratamente il muscolo residuo e altri tessuti molli sovrastanti la colonna vertebrale per esporre l'osso vertebrale, afferrando il processo spinoso delle vertebre con una pinza dentata e muovendo leggermente la pinza su e giù per identificare le vertebre che verranno rimosse. Quindi, inserire la punta di un paio di forbici curve e smussate su entrambi i lati del forame intervertebrale esposto, caudale alla lamina vertebrale da asportare, e tagliare bilateralmente le articolazioni intervertebrali di collegamento. Quindi, sollevare la lamina verso l'alto e tagliare l'attacco superiore della lamina per isolare e rimuovere l'osso.

Quando si taglia e si rimuove la lamina vertebrale, fare attenzione a inclinare sempre le forbici verso l'alto, in modo da non danneggiare il midollo spinale sottostante.

Con la vena dorsale della linea mediana che funge da punto di riferimento, inserire l'asta piegata di 45 gradi di una punta dell'ago calibro 30 con il lato smussato rivolto verso l'alto, a 1 millimetro di profondità nella superficie dorsolaterale del midollo spinale e a circa 0,5 millimetri lateralmente su entrambi i lati della linea mediana. Spostare l'ago di circa due millimetri dalla direzione caudale a quella rostrale, in modo che l'intera lunghezza dello smusso sia inserita nel cordino. Quindi, ripercorri il percorso dell'ingresso per rimuovere l'ago.

Per chiudere la ferita, rimuovere il divaricatore e utilizzare una sutura assorbibile 6-0 per unire i muscoli della schiena su entrambi i lati della lesione lungo la linea mediana e una sutura di seta 4-0 per chiudere la pelle sovrastante.