JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 3:56 min. • April 28th, 2025
Inizia con una sezione cerebrale di primati non umani fissata chimicamente.
Il fissativo a base di aldeidi lega le proteine, preservando la struttura dei tessuti, ma lascia alcuni residui di aldeidi reattive.
Lavare per rimuovere lo strato crioprotettivo che circonda la sezione di tessuto.
Aggiungere un agente riducente per neutralizzare i gruppi aldeidici reattivi, producendo sottoprodotti di reazione.
Lavare per rimuovere questi sottoprodotti e gli agenti riducenti in eccesso.
Applicare una soluzione bloccante per prevenire il legame non specifico degli anticorpi.
Aggiungere anticorpi primari mirati a una proteina espressa in siti specifici sulla membrana neuronale.
Lavare per rimuovere gli anticorpi non legati.
Aggiungere anticorpi secondari biotinilati mirati agli anticorpi primari.
Lavare per rimuovere gli anticorpi non legati.
Sovrapporre con complessi avidina-biotina-perossidasi che si legano agli anticorpi secondari.
Lavare nuovamente per rimuovere i complessi non legati.
Introdurre un substrato cromogenico insieme al perossido di idrogeno. In presenza di perossido di idrogeno, l'enzima perossidasi ossida il substrato, formando precipitati marroni.
Iniziare trasferendo sezioni spess
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