Colorazione immunoistochimica delle criosezioni del tessuto coronale di ratto per microglia e neuroni

Prelevare un vetrino contenente criosezioni di tessuto coronale di ratto fisse e permeabilizzate.

Delinea le sezioni con una penna idrofobica per creare un ambiente di colorazione controllato.

Trasferire le sezioni in una camera di umidità per evitare l'essiccazione dei reagenti e dei tessuti durante le fasi successive.

Trattare le sezioni con proteine sieriche per bloccare i siti di legame non specifici.

Risciacquare con tampone per rimuovere le proteine del siero in eccesso.

Incubare con anticorpi primari che hanno come bersaglio proteine specifiche su microglia e neuroni.

Lavare con tampone per rimuovere gli anticorpi primari non legati.

Incubare con anticorpi secondari coniugati con fluorofori che si legano agli anticorpi primari.

Lavare con tampone per rimuovere gli anticorpi secondari non legati. Quindi, risciacquare con acqua bidistillata.

Applicare un mezzo di montaggio acquoso per proteggere il segnale fluorescente, posizionare un vetrino coprioggetti e sigillarlo.

Visualizzare le sezioni al microscopio a fluorescenza per visualizzare microglia e neuroni immunomarcati.

Asciugare i bordi dei vetrini e creare un bordo idrorepellente attorno al bordo del vetrino con un pennarello, per