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Neuroscienze
0 visualizzazioni • 3:36 min. • April 28th, 2025
Prendi una diapositiva con sezioni incorporate in paraffina di neurosfere tumorali cerebrali, gruppi di cellule staminali neurali che esibiscono biomarcatori proteici nucleari specifici per il tumore.
Scalda per sciogliere la paraffina, rimuovila usando lo xilene e reidrata il tessuto usando concentrazioni di alcol decrescenti.
Riscalda in un tampone acido contenente detersivo per smascherare gli epitopi sui biomarcatori e permeabilizzare le membrane cellulari.
Risciacquare, quindi trattare con un agente ossidante per inattivare gli enzimi perossidasi endogeni, prevenendo segnali non specifici.
Applica una soluzione bloccante per mascherare siti di legame non specifici.
Incuba con anticorpi primari che prendono di mira gli epitopi dei biomarcatori.
Risciacquare, quindi trattare con anticorpi secondari coniugati con biotina che si legano agli anticorpi primari.
Risciacquare e incubare con un'avidina coniugata con l'enzima perossidasi, che si lega alla biotina.
Aggiungi un substrato cromogenico e un agente ossidante.
La perossidasi utilizza l'agente per convertire il substrato in precipitati colorati, etichettando la posizione del biomarcatore.
Controcolora i nuclei, disidrata il tessuto nell
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