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Neuroscienze
0 visualizzazioni • 2:08 min • April 28th, 2025
Inizia con un campione di tessuto cerebrale, che non è trasparente a causa della presenza di pigmenti e lipidi. Questi componenti causano la dispersione della luce nei neuroni marcati in fluorescenza.
Incuba sequenzialmente il tessuto in soluzioni con concentrazioni crescenti di metanolo per rimuovere l'acqua da esso e disidratare gradualmente il tessuto.
Quindi, tratta questo tessuto con metanolo concentrato per eliminare l'acqua residua, garantendo la completa disidratazione.
Successivamente, trasferisci il tessuto in un solvente di pulizia iniziale contenente diclorometano e metanolo.
Incuba agitando delicatamente per permettere al solvente di penetrare profondamente nel tessuto.
Il diclorometano rimuove pigmenti e lipidi dai tessuti, riducendo la dispersione della luce e migliorando la trasparenza.
Infine, trasferisci il tessuto in dibenzil etere, un solvente idrofobo e incuba senza agitare.
Il solvente agisce come agente di pulizia finale che migliora ulteriormente la trasparenza del tessuto.
Questo processo migliora la penetrazione della luce, consentendo una visualizzazione più chiara dei neuroni marcati e delle loro connessioni nel tessuto cerebrale campione.
Incubare il campione in serie in metanolo al 20%, 40%, 60%, 80% e 100% per un'ora ciascuno a temperatura ambiente. Quindi, incubarlo in metanolo fresco al 100% per una notte. Il giorno successivo, incubare il campione in DCM al 66% preparato di fresco in metanolo al 33% per tre ore a temperatura ambiente con agitazione. Dopo tre ore, incubare il campione in etere dibenzilico senza agitare fino a quando non è limpido. Quindi, conservarlo in etere dibenzilico fino all'imaging.