Microscopia a immunofluorescenza di cellule neurali differenziate da cellule derivate dal sangue periferico

Prendi un vetrino multicamera con vetrini coprioggetti rivestiti di proteine contenenti cellule neurali derivate dal sangue periferico fisse e permeabili, comprese le cellule progenitrici neuronali, gli astrociti e i neuroni.

Aggiungi una soluzione di blocco per bloccare siti di legame non specifici.

Incubare con anticorpi coniugati con colorante fluorescente che si legano a specifiche proteine cellulari, consentendo l'identificazione di tipi di cellule neurali.

Lavare con tampone per rimuovere gli anticorpi non legati.

Incubare con un colorante nucleare fluorescente per colorare i nuclei.

Trasferisci il vetrino coprioggetti su una diapositiva con supporti di montaggio. Quindi, posizionare il vetrino preparato sotto un microscopio a fluorescenza dotato di filtri appropriati.

Usando specifiche lunghezze d'onda della luce, eccita i coloranti fluorescenti, facendoli emettere luce a lunghezze d'onda più lunghe.

I segnali fluorescenti emessi corrispondono alle proteine cellulari marcate, evidenziando distintamente diversi tipi di cellule neurali e confermando la differenziazione delle cellule del sangue riprogrammate.

Aggiungere una soluzione bloccante di PBS e 5% BSA. Bloccare le celle a temperatura ambiente su una piastra a bilanciere per un'ora. Preparare un'appropriata diluizione degli anticorpi in BSA PBS all'1% e incubare le cellule con gli anticorpi su una piastra a bilanciere per 1,5 ore a temperatura ambiente. Lavare le celle tre volte con PBS per cinque minuti per lavaggio. Incubare le cellule con DAPI e montare i vetrini coprioggetti con mezzi di montaggio per la visualizzazione al microscopio.