Analisi microscopica delle sinapsi in fette di ippocampo di topo mediante immunofluorescenza

Posiziona una fetta di ippocampo dal cervello di un topo in un pozzetto contenente un tampone. La fetta contiene una rete di neuroni che comunicano attraverso le sinapsi.

I terminali dei neuroni presinaptici contengono vescicole piene di neurotrasmettitori con caratteristici trasportatori transmembrana, mentre i terminali postsinaptici presentano caratteristiche proteine dell'impalcatura che regolano i recettori dei neurotrasmettitori. Entrambi fungono da marcatori chiave per le strutture sinaptiche.

Sostituisci il tampone con una soluzione che blocca la permeabilizzazione e incuba con agitazione per permeabilizzare le membrane cellulari e bloccare i siti di legame non specifici.

Aggiungi anticorpi primari mirati ai marcatori presinaptici e postsinaptici e incuba con agitazione per permettere il legame.

Lava la fetta, aggiungi anticorpi secondari coniugati con fluoroforo specifici per gli anticorpi primari e incuba con agitazione al buio.

Lava la fetta, poi montala su una diapositiva.

Utilizzando un microscopio confocale, identifica la regione di interesse e ingrandisci per visualizzare le sinapsi.

Cattura immagini per identificare i marcatori presinaptici e postsinaptici marcati in modo