Imaging dell'attivazione neuronale dell'ippocampo nelle sezioni del cervello del topo

Inizia con sezioni cerebrali di topo che espongono l'ippocampo dorsale, ricco di neuroni.

Aggiungi perossido di idrogeno per estinguere l'attività della perossidasi neuronale, seguito dal lavaggio.

Tratta con un tampone di permeabilizzazione, poi applica un tampone di blocco per bloccare il legame non specifico.

Aggiungi gli anticorpi primari e incuba con agitazione. Questi anticorpi si legano alle proteine marcatrici di attivazione neuronale.

Lava e applica anticorpi secondari coniugati con biotina per legare gli anticorpi primari.

Risciacqua e introduci un complesso avidina-biotina-perossidasi che si lega alla biotina sui coniugati.

Lava di nuovo, poi aggiungi un substrato cromogenico, che viene ossidato dalla perossidasi per generare un precipitato marrone. Ferma la reazione con PBS.

Trasferisci le sezioni su un vetrino rivestito di gelatina e disidratale usando concentrazioni crescenti di etanolo. Quindi, elimina le sezioni in xilene e montale.

Posiziona il vetrino sotto un microscopio a campo chiaro.

Sotto l'illuminazione leggera, le regioni non colorate trasmettono luce e appaiono luminose, mentre i neuroni colorati assorbono e riflettono la luce e appaiono più scuri.

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