Imaging in vivo a due fotoni della retina del topo

Prendi un topo transgenico anestetizzato con la testa fissata ad angolo su un supporto per l'imaging in vivo della retina del topo.

La retina contiene cellule gangliari retiniche, o RGC, che esprimono una proteina marcata con fluoroforo.

Applica il lubrificante per gli occhi e monta un vetrino coprioggetti sopra l'occhio.

Sotto un microscopio, illumina uniformemente la retina per eccitare le proteine fluorescenti negli RGC.

Utilizzando la fluorescenza emessa, ottieni una visione a campo ampio delle RGC del piano focale e delle RGC fuori fuoco.

Passa alla modalità di imaging a due fotoni, focalizzando la luce del vicino infrarosso a bassa energia nello strato RGC.

Nel punto focale, l'energia combinata di due fotoni eccita il fluoroforo, che poi rilascia energia sotto forma di fluorescenza.

Poiché l'eccitazione è confinata a un singolo punto, la fluorescenza da altri piani focali è ridotta al minimo.

Cattura immagini su più piani focali lungo l'asse z per visualizzare l'intero livello RGC.

Applicare un collirio lubrificante su entrambi gli occhi del mouse. Ruotare il braccio principale del supporto per la testa fino a quando la pupilla di un occhio non è orientata in linea con il percorso