JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
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Inizia con un topo transgenico anestetizzato con una finestra circolare di imaging in vetro e una piastra per la testa impiantata sul suo cranio.
Le cellule microgliali o immunitarie e i neuroni sono marcati con proteine fluorescenti.
Poi, fissa il topo sul tavolino del microscopio a due fotoni.
Quindi, inietta un colorante fluorescente intraperitoneale per colorare i vasi sanguigni di rosso.
Pulisci la finestra di imaging in vetro, applica una goccia di soluzione salina e abbassa l'obiettivo del microscopio.
Quindi, imposta la luce laser per catturare un'immagine dei vasi sanguigni. Registra il modello di ramificazione e le coordinate per individuare e visualizzare la stessa regione in un secondo momento.
Ora, imposta il laser per eccitare le proteine fluorescenti, provocando la fluorescenza della microglia e dei neuroni.
Utilizzando il modello di ramificazione registrato, localizza la stessa regione e cattura regolarmente immagini di cellule.
La rete vascolare e i neuroni rimangono stabili, mentre i cambiamenti di posizione della microglia nel tempo riflettono le dinamiche immunitarie in risposta all'attività neuronale.
Praticare un'apertura circolare di circa 4 millimetri nel crani
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