Imaging al microscopio confocale di pergole dendritiche intatte e morfologia della colonna vertebrale in un cervello di topo pulito

Prendi un cervello di topo ripulito con cellule che esprimono proteine fluorescenti e lipidi rimossi per la trasparenza per l'imaging di strutture profonde ad alta risoluzione.

Una rete di idrogel preserva le biomolecole e mantiene le reti neuronali.

Trasferire il cervello in una camera di imaging contenente un anello di agarosio per il supporto.

Fissare il tessuto con adesivo e riempire la camera con una soluzione di corrispondenza dell'indice di rifrazione per ridurre al minimo la dispersione della luce e creare un ambiente di imaging stabile.

Posizionare la camera su un tavolino per microscopio confocale e abbassare delicatamente l'obiettivo nella soluzione per stabilire una colonna di contatto continua.

Utilizzare l'epifluorescenza per localizzare le regioni di interesse. Quindi, regola il laser e i parametri di imaging per ottimizzare la qualità dell'immagine.

Acquisisci una serie di z-stack per creare una rappresentazione tridimensionale del tessuto.

Utilizzare un software appropriato per analizzare la morfologia cellulare, compresi gli alberi dendritici, le loro spine e la distribuzione e la densità dei neuroni.

Per costruire una grande camera di imaging tissutale per tessuti