Indagine sulle origini dei neuroni sensoriali nella dura madre mediante microscopia a fluorescenza

Prendete un ratto anestetizzato con un cranio esposto coperto da un drappo.

Praticare un foro per esporre la dura madre, lo strato più esterno del cervello, innervato da neuroni sensoriali sensibili al dolore originati dal ganglio del trigemino e dai gangli della radice dorsale cervicale.

Costruisci una barriera per prevenire perdite, introduci un tracciante retrogrado e sigilla il foro.

Sutura la ferita e lascia che il ratto si riprenda.

Il tracciante entra negli assoni neuronali sensoriali, viaggia retrogradamente verso i loro gangli ed entra nei corpi cellulari neuronali.

Eutanasia nel ratto e sezionare i gangli.

Preparare le sezioni dei gangli e montarle sui vetrini.

Aggiungere una soluzione per permeabilizzare le membrane cellulari e mascherare i siti di legame non specifici.

Incubare con anticorpi primari che hanno come bersaglio il tracciante e i neuropeptidi specifici dei neuroni sensoriali.

Aggiungere anticorpi secondari marcati in fluorescenza specifici per gli anticorpi primari.

Utilizzando la microscopia a fluorescenza, osservare la colocalizzazione di neuropeptidi e traccianti all'interno dei corpi cellulari, confermando l'origine gangliare dei neuroni sensoriali.

Radi la testa