Incorporamento del cervello di Drosophila in una matrice per l'imaging time-lapse dei neuroni dell'orologio circadiano

Inizia con un coperchio di Petri contenente il cervello larvale di Drosophila, pre-esposto a un ciclo luce/buio. La fetta contiene neuroni orologio fluorescenti che esprimono proteine.

Aggiungere un terreno ricco di sostanze nutritive con antibiotici per supportare la sopravvivenza neuronale e una soluzione calda di fibrinogeno.

Mescolare delicatamente la soluzione per distribuire uniformemente il fibrinogeno.

Mettere una piccola quantità di questa miscela sul vetrino coprioggetti di un piatto con fondo di vetro.

Aggiungere trombina per reagire con il fibrinogeno per indurre la formazione di una matrice di fibrina tridimensionale.

Trasferire il cervello su questa matrice, posizionandola anteriormente verso il basso per allineare i neuroni dell'orologio per l'imaging.

Piegare la matrice sul cervello per ancorarla e impedire il movimento.

Aggiungere un terreno ricco di sostanze nutritive per inattivare l'attività della trombina.

Sigillare il piatto con una membrana permeabile ai gas per mantenere l'idratazione e la vitalità neuronale. Eseguire l'imaging

a fluorescenza time-lapse a intervalli specifici.

I cambiamenti di fluorescenza nei neuroni dell'orologio rivelano la loro attivazion