Imaging in vitro del calcio in colture di ippocampi di ratto a breve e lungo termine

Prendiamo una coltura neuronale ippocampale di ratto a breve termine che rappresenta i neuroni giovani e una cultura a lungo termine che rappresenta i neuroni invecchiati.

I neuroni invecchiati mostrano una maggiore densità di canali del calcio voltaggio-dipendenti di tipo L, o L-VGCC, che rimangono aperti per una durata più lunga dopo la depolarizzazione della membrana.

Incubare con un indicatore di calcio fluorescente che si diffonde nelle cellule, quindi lavare per rimuovere il colorante in eccesso.

Posizionare le colture in una camera di perfusione al microscopio a fluorescenza.

Introdurre una soluzione contenente neurotrasmettitori che si legano ai recettori sui neuroni, inducendo l'afflusso di ioni sodio e innescando la depolarizzazione della membrana.

La depolarizzazione attiva gli L-VGCC, consentendo l'afflusso di calcio nel citoplasma.

Nella coltura a lungo termine, la maggiore densità e l'apertura prolungata degli L-VGCC portano al sovraccarico di calcio, un segno distintivo dell'invecchiamento neuronale.

Il legame del calcio all'indicatore genera fluorescenza, con neuroni invecchiati che mostrano una maggiore intensità di fluorescenza, riflettendo un aumento dei livelli di calc