Imaging delle placche di beta-amiloide in sezioni di tessuto cerebrale mediante immunomarcatura e colorazione con curcumina

Inizia con sezioni cerebrali da un modello murino neurodegenerativo.

Incuba con una soluzione bloccante integrata con detergente per aumentare la permeabilità tissutale e bloccare il legame non specifico. Scartare la soluzione.

Introdurre anticorpi primari mirati alle placche di amiloide-beta. Incubare con agitazione per gli anticorpi che interagiscono con le placche di amiloide-beta, quindi lavare.

Aggiungere anticorpi secondari rossi marcati con fluoroforo e incubare al buio per consentire agli anticorpi di interagire.

Lavare per rimuovere gli anticorpi non legati, seguito da un lavaggio con alcol.

Aggiungere la curcumina, che lega gli amiloidi ricchi di fogli beta con un'elevata affinità, quindi lavare.

Successivamente, trattare con concentrazioni crescenti di alcol, disidratando le sezioni cerebrali. Aggiungere xilene per rimuovere eventuali tracce di reagenti.

Montare una sezione su un vetrino e osservare al microscopio a fluorescenza.

Utilizzare un laser con lunghezza d'onda di 590 nanometri per eccitare i fluorofori rossi sugli anticorpi secondari. Cattura l'immagine.

Passa a un laser con lunghezza d'onda di 480 nanometri per eccitare la curcumina, emettendo fluorescenza verde.

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