JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 6:41 min. • May 29th, 2025
Prendi una sezione fissa di cervello spesso da un topo infetto dal virus della rabbia.
Il virus infetta i neuroni e si replica, dando luogo alle proteine virali presenti all'interno delle cellule.
Trattare con un detergente per permeabilizzare le membrane cellulari e una soluzione bloccante per mascherare i siti di legame aspecifici.
Incubare con anticorpi primari che hanno come bersaglio le proteine virali, seguiti da anticorpi secondari coniugati con fluorofori che si legano agli anticorpi primari.
Trattare con un colorante fluorescente legante l'acido nucleico per marcare il nucleo.
Disidratare il tessuto aumentando le concentrazioni di alcol, quindi applicare una soluzione schiarente per aumentare la trasparenza dei tessuti per l'imaging.
Montare la sezione in una camera di imaging, riempirla con la soluzione di chiarificazione e sigillarla.
Utilizzando la microscopia a scansione laser confocale, è possibile visualizzare il tessuto separatamente utilizzando le etichette fluorescenti, quindi unirle per creare un'immagine bidimensionale.
Acquisisci immagini su diversi piani focali del tessuto e combinale per generare una rappresentazione tridimensionale per valutare la progressione dell'
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