JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 5:40 min. • May 29th, 2025
Prelevare un segmento di tessuto chimicamente fissato e cancellato da un embrione di topo transgenico che esprime la proteina fluorescente verde (GFP) nei motoneuroni spinali.
Montare il fazzoletto verticalmente su un puntale per pipetta modificato.
Fissare la punta a un capillare fissato all'interno del microscopio a fluorescenza a foglio luminoso.
Posizionare una camera del campione riempita di tampone sotto il tessuto per immergerlo e rimuovere i detriti.
Utilizzando il software di imaging, allineare il tessuto nel percorso della luce.
La
sorgente luminosa emette un sottile foglio di luce laser, eccitando le GFP su un singolo piano del tessuto per emettere fluorescenza.
Un rivelatore posizionato perpendicolarmente al percorso della luce cattura la fluorescenza emessa.
Acquisire immagini dei motoneuroni spinali per generare una ricostruzione 3D della morfologia delle ramificazioni assonali.
Utilizza il software per mappare gli assoni, identificando i modelli di ramificazione e gli endpoint per valutare la crescita e la connettività dei motoneuroni.
Imposta ottiche di illuminazione 5X/0,1 e ottiche di rilevamento 5X/0,16. Assemblare il portacampioni e il capillare del campione. Preparare
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