JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 3:34 min. • May 29th, 2025
Inizia con sezioni tangenziali prefissate delle sezioni corticali cerebrali appiattite. Lavare per rimuovere le tracce fissative.
Colorare le sezioni con una soluzione di diaminobenzidina o DAB e solfato di nichel-ammonio.
Il DAB si diffonde nei neuroni corticali e reagisce con la citocromo ossidasi nei mitocondri, formando un precipitato scuro. Il solfato di nichel-ammonio scurisce il precipitato, migliorando il contrasto.
Aggiungere paraformaldeide per fermare la reazione di colorazione, quindi risciacquare.
Montare le sezioni su un vetrino e disidratarle con lavaggi a base di etanolo.
Risciacquare con isopropanolo e xilene per liberare la sezione e migliorare la trasmissione della luce.
Applicare un mezzo di montaggio e applicare un vetrino coprioggetti.
Quando vengono ripresi con un microscopio a campo chiaro, all'interno dei neuroni corticali, i precipitati assorbono e diffondono la luce, facendoli apparire scuri.
Al contrario, le aree non colorate e pulite trasmettono la luce e appaiono luminose.
Questo contrasto evidenzia i moduli corticali come strutture scure e irregolari su uno sfondo più chiaro, che rappresentano cluster neurali attivi coinvolti nell'elaborazione delle infor
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