JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Neuroscienze
0 visualizzazioni • 4:38 min. • May 29th, 2025
Prendere le cellule isolate dai nervi sciatici di topo e dai gangli della radice dorsale o DRG.
Incubare con anticorpi marcati con fluorofori contro CD45 e CD11b e con anticorpi marcati con biotina contro MHC di classe II, per marcare le cellule immunitarie.
Incubare con streptavidina marcata con fluoroforo che si lega alla biotina.
Trattare con un fissativo per stabilizzare la struttura cellulare.
Introdurre un tampone di permeabilizzazione con una colorazione fluorescente del DNA per permeabilizzare le membrane ed etichettare i nuclei.
Utilizzando un citometro a flusso, far passare le cellule attraverso il raggio laser per valutare le caratteristiche ottiche e di fluorescenza.
Rimuovere gli aggregati con una maggiore fluorescenza del DNA per isolare le singole cellule e rilevare la fluorescenza dai marcatori.
Identificare le cellule che esprimono CD45, un marcatore caratteristico delle cellule immunitarie, confermandone la presenza.
La maggior parte delle cellule CD45-positive nel DRG esprimono CD11b e MHC di classe II, indicando cellule simili alla microglia, che sono assenti nei nervi sciatici.
Questa tecnica integra l'imaging per l'analisi dell'eterogeneità delle cellule immunitarie a
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