Imaging in vivo della retina di topo mediante tomografia a coerenza ottica

Prendete un topo geneticamente modificato anestetizzato che presenta atrofia ottica.

Le pupille sono dilatate per una maggiore penetrazione della luce.

Somministrare anestetico per immobilizzare gli occhi. Applicare gocce per l'idratazione corneale. Quindi, avvolgi il mouse in una garza per mantenere il calore corporeo.

Applicare il gel per ridurre al minimo la rifrazione della luce. Fissare il mouse nella cassetta del sistema di tomografia a coerenza ottica nel dominio spettrale, assicurando il corretto posizionamento della testa.

Allineare gli assi ottici dell'occhio destro e della lente di imaging. Utilizzare i controlli di allineamento per centrare la testa del nervo ottico nel campo di imaging, garantendo il corretto allineamento della retina.

La luce a bassa coerenza diretta nella retina si riflette sugli strati con indici di rifrazione variabili. La luce riflessa si combina con un raggio di riferimento per generare modelli di interferenza, creando un'immagine in sezione trasversale ad alta risoluzione della retina.

Dopo l'imaging, lasciare che il mouse si riprenda.

L'analisi dell'immagine OCT rivela l'ispessimento dello strato del complesso delle cellule ganglionari, un segno distintivo dell'atrofia ottica.

Rimuovere le gocce e ripetere l'installazione al 10% di fenilefrina e allo 0,5% di tropicamide. Quando gli occhi sono sufficientemente dilatati per l'imaging, lubrificare gli occhi con colliri a base di glicole viscoso per fornire idratazione corneale e avvolgere il topo in un foglio di garza chirurgica per mantenerlo caldo.

Utilizzando una spugna o uno stoppino di cotone, applicare uno strato sottile di gel oftalmico integrato con ipromellosa allo 0,3% su ciascun occhio. Nel farlo, metti da parte le ciglia e i baffi. Posizionare il mouse nella cassetta con la testa dritta e rivolta in avanti e posizionare con cura la barra del morso in bocca. Metti un rotolo di cotone sotto il lato dell'animale per l'occhio che viene esaminato.

Quindi, tenendo la punta di puntamento a clip sull'obiettivo specifico del mouse, ruotare la vite del traslatore Z in senso antiorario per portare l'obiettivo verso l'occhio. Pre-impostare la posizione del mouse ruotando e ruotando la cassetta e ruotando la barra del morso e le viti X-traslatore fino a quando l'occhio sperimentale non è posizionato per guardare direttamente nell'obiettivo.

Quando gli assi ottici degli occhi e della lente sono allineati, selezionare la prima scansione dell'esame. Fai clic su Inizia a mirare e usa la vite del traslatore Z per spostare la retina verticalmente nel pannello di sinistra e orizzontalmente nel pannello di destra. Ruotando la cassetta, spostare la testa del nervo ottico verso l'alto o verso il basso per portarla al centro del pannello destro. Utilizzare la vite della barra del morso per raddrizzare la retina all'interno del pannello destro e ruotare la cassetta per posizionare la testa del nervo ottico al centro del pannello sinistro.

Quindi, utilizzare la vite X-traslatore per livellare la retina all'interno del pannello di sinistra e, tenendo presente la funzione principale di ciascun modulatore, regolare ulteriormente la posizione della retina per la perfetta centralizzazione sulla testa del nervo ottico. Quando la retina è in posizione, fare clic su Avvia istantanea per iniziare la scansione della tomografia a coerenza ottica nel dominio spettrale.

Non dimenticare di salvare la scansione e il referto. Se necessario, regolare la centralizzazione. Rimuovere il mouse dalla cassetta. Applicare gel oftalmico con ipromellosa allo 0,3% su ciascun occhio e posizionare il mouse su una piastra riscaldante con monitoraggio fino al completo recupero.