Imaging time-lapse della migrazione radiale dei neuroni corticali in fette di cervello embrionale di topo trasdotto

Prendiamo un inserto di membrana contenente fette di cervello organotipico embrionale di topo trasdotto, dove i neuroni e le cellule gliali radiali esprimono proteine fluorescenti, consentendone la visualizzazione.

Utilizzando la microscopia a fluorescenza, selezionare una fetta con neuroni corticali fluorescenti che migrano radialmente verso la superficie piale della fetta utilizzando scaffold gliali radiali intatti.

Trasferire l'inserto della membrana con la fetta selezionata in un piatto con fondo di vetro con terreno per supportare l'attività cellulare durante l'imaging.

Posizionare la capsula nella camera climatizzata del microscopio confocale invertito per garantire la vitalità cellulare.

Regola i parametri di imaging per acquisire immagini nitide riducendo al minimo il fotodanneggiamento.

Quindi, configura uno Z-stack nella regione di destinazione per visualizzare le strutture cellulari.

Avvia l'imaging time-lapse a intervalli regolari.

Analizzare le immagini per valutare la migrazione radiale dei neuroni corticali dalla zona subventricolare verso la placca corticale lungo gli scaffold gliali radiali, evidenziando i modelli di migrazione neuronale.

Selezionare una fetta di cervello